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  <div   id="rd29ns1ovs"   class="title_page"><h1>550萬(wàn)個(gè)灰棗接穗的品種純度進(jìn)行鑒定</h1><div   id="rd29ns1ovs"   class="des_page">

<p class="infot"><time>發(fā)布時(shí)間:2023/12/17</time>
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            <em> 分類:<a href="http://www.ninbeiqian.cn/category/case/appraisal-services">鑒定服務(wù)</a> </em>
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<section class="single_content_box">
	
  <p style="font-weight: 400;">新疆農(nóng)林業(yè)司法鑒定所司法鑒定檢驗(yàn)報(bào)告書</p>
<p style="font-weight: 400;">新農(nóng)林檢字[2008]第0321號(hào)</p>
<p style="font-weight: 400;">一、基本情況</p>
<p style="font-weight: 400;">委托單位：新和縣塔木托格拉克鄉(xiāng)人民政府</p>
<p style="font-weight: 400;">委托鑒定事項(xiàng)：對(duì)新和縣塔木托格拉克鄉(xiāng)所采購(gòu)的550萬(wàn)個(gè)灰棗接穗的品種純度進(jìn)行鑒定。</p>
<p style="font-weight: 400;">受理日期：2008年3月21日</p>
<p style="font-weight: 400;">鑒定材料：棗樹接穗</p>
<p style="font-weight: 400;">鑒定日期：2008年3月21日</p>
<p style="font-weight: 400;">鑒定地點(diǎn)：新和縣新疆惠華食品有限公司6號(hào)冷庫(kù)</p>
<p style="font-weight: 400;">在場(chǎng)人員：朱永剛、劉國(guó)權(quán)、阿地力阿吾提、海仁沙，張長(zhǎng)江、任生理。</p>
<p style="font-weight: 400;">二、檢案摘要</p>
<p style="font-weight: 400;">新和縣塔木托格拉克鄉(xiāng)人民政府采購(gòu)了550萬(wàn)個(gè)灰棗接穗，為查清該批灰棗接穗的純度，特委托我所對(duì)550萬(wàn)個(gè)灰棗接穗的品種純度進(jìn)行鑒定。</p>
<p style="font-weight: 400;">三、檢驗(yàn)過(guò)程</p>
<p style="font-weight: 400;">我所接受委托后，于2008年3月21日指派鑒定人員張長(zhǎng)江、任生理二人組成鑒定組，到達(dá)新和縣新疆惠華食品有限公司6號(hào)冷庫(kù)，提取了棗樹接穗樣品：</p>
<p style="font-weight: 400;">（一）、所取樣品的抽樣基數(shù)為550萬(wàn)個(gè)灰棗接穗（分裝在522個(gè)塑料袋內(nèi)）。</p>
<p style="font-weight: 400;">（二）、檢驗(yàn)方法及過(guò)程：</p>
<p style="font-weight: 400;">1、DNA模板的制備</p>
<p style="font-weight: 400;">提取程序參照Paterson所述的CTAB法。</p>
<p style="font-weight: 400;">（1）取3g接穗枝皮，在液氮冷凍下迅速研磨成粉末，放入50mL離心管中，加入15mL裂解緩沖液（65℃），混勻，65℃水浴30～60mim</p>
<p style="font-weight: 400;">（2）水浴后加入等體積的氯仿－異戊醇（24：1），16℃，5000r／min，離心10min。</p>
<p style="font-weight: 400;">（3）吸取上清液加入等體積氯仿－異戊醇（24：1），4℃，5000r／min，離心10min。</p>
<p style="font-weight: 400;">（4）吸取上清液加入0.6倍體積的冰凍異戊醇，沉淀DNA。</p>
<p style="font-weight: 400;">（5）DNA用70％乙醇侵洗2～3次。室溫干燥后，容于700μL 1×TE中。</p>
<p style="font-weight: 400;">（6）加入15μLRNaseA，37℃水浴保溫1h。</p>
<p style="font-weight: 400;">（7）加入等體積的酚－氯仿溶液，10000r／min 4℃ 離心10min。</p>
<p style="font-weight: 400;">（8）吸取上清液加等體積的氯仿－異戊醇（24：1），10000r／min 4℃ 離心10min。</p>
<p style="font-weight: 400;">（9）吸取上清液加等體積的水飽和乙醚和1／3體積的5M NaCl，10000r／min 4℃ 離心10min。</p>
<p style="font-weight: 400;">（10）吸取上清液，加入1／10體積3M醋酸鈉，2倍體積的無(wú)水乙醇。靜止2～5min，挑DNA，風(fēng)干，加100μL 1×TE溶解。-20℃下保存?zhèn)溆谩?/p>
<p style="font-weight: 400;">（12）用紫外分光光度計(jì)測(cè)定DNA樣品的質(zhì)量和濃度。根據(jù)測(cè)定數(shù)值，稀釋DNA至試驗(yàn)需要濃度。</p>
<p style="font-weight: 400;">2 AFLP擴(kuò)增與產(chǎn)物檢測(cè)（以下過(guò)程均在德國(guó)Biometra公司生產(chǎn)的T Gradient PCR儀中進(jìn)行）</p>
<p style="font-weight: 400;">2.1 AFLP擴(kuò)增體系及擴(kuò)增程序</p>
<p style="font-weight: 400;">（1）模板DNA的酶切體系及條件</p>
<p style="font-weight: 400;">成分??????????????????????????????????????????體積</p>
<p style="font-weight: 400;">DNA（150ng／μL）????????????????????????????? 3μL</p>
<p style="font-weight: 400;">H2O?????????????????????????????????????????? 14.3μL</p>
<p style="font-weight: 400;">10×NEB Buffer??????????????????????????????? 2μL</p>
<p style="font-weight: 400;">100×BSA?????????????? ???????????????????????0.2μL</p>
<p style="font-weight: 400;">Mse I（15U／μL）????????????????????????????? 0.2μL</p>
<p style="font-weight: 400;">EcoR I（10／μL）????????????????????????????? 0.3μL</p>
<p style="font-weight: 400;">總體積20μL／管</p>
<p style="font-weight: 400;">酶切溫度37℃，時(shí)間3h。</p>
<p style="font-weight: 400;">（2）酶切DNA片斷的連接體系及條件</p>
<p style="font-weight: 400;">DNA在酶切后加入以下成分，總體積30μL／管。37℃下過(guò)夜，連接結(jié)束后65℃變性10min。</p>
<p style="font-weight: 400;">成分??????????????????????????????????? ??????體積</p>
<p style="font-weight: 400;">H2O??????????????????????????????????????????? 2.7μL</p>
<p style="font-weight: 400;">10×T4 Buffer????????????????????????????????? 3μL</p>
<p style="font-weight: 400;">EcoR I接頭（5p mole／μL）???????????????????? 1.0μL</p>
<p style="font-weight: 400;">Mse I接頭（50p mole／μL）???????????????????? 1.0μL</p>
<p style="font-weight: 400;">10mM?ATP?????????????????????????????????????? 1.8μL</p>
<p style="font-weight: 400;">T4-DNA連接酶（3U／μL）??????????????????????? 0.5μL</p>
<p style="font-weight: 400;">（3）連接產(chǎn)物的預(yù)擴(kuò)增體系和擴(kuò)增程序</p>
<p style="font-weight: 400;">將連接產(chǎn)物用0.1×TE稀釋10倍用于預(yù)擴(kuò)增。</p>
<p style="font-weight: 400;">成分??????????????????????????????????????????體積</p>
<p style="font-weight: 400;">連接稀釋DNA?????????????????????????????????? 5μL</p>
<p style="font-weight: 400;">H2O??????????????????????????????????????????? 10.1μL</p>
<p style="font-weight: 400;">10×PCR Buffer??? ?????????????????????????????2μL</p>
<p style="font-weight: 400;">2.5mM?dNTP???????????????????????????????????? 1.6μL</p>
<p style="font-weight: 400;">Mse I引物（M00，50ng／μL）??????????????????? 0.6μL</p>
<p style="font-weight: 400;">EcoR I引物（M00，50ng／μL）?????????????????? 0.6μL</p>
<p style="font-weight: 400;">Taq酶（5U／μL）?????????????????????????????? 0.1μL</p>
<p style="font-weight: 400;">礦物油?????????????????????????? ??????????????8μL</p>
<p style="font-weight: 400;">預(yù)擴(kuò)增程序：</p>
<p style="font-weight: 400;">Step1?????????????????????95℃????????????????? 2min</p>
<p style="font-weight: 400;">Step2?????????????????????95℃????????????????? 30s</p>
<p style="font-weight: 400;">Step3?????????????????????56℃????????????????? 30s</p>
<p style="font-weight: 400;">Step4?????????????????????72℃????????????????? 60s</p>
<p style="font-weight: 400;">Step5????????????????? GO TO Step2????????????? 30 cycle</p>
<p style="font-weight: 400;">Step6?????????????????????72℃????????????????? 10min</p>
<p style="font-weight: 400;">Step7?????????????????????10℃????????????????? 10h</p>
<p style="font-weight: 400;">（4）DNA片斷的選擇擴(kuò)增和擴(kuò)增程序</p>
<p style="font-weight: 400;">將預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物用0.1×TE稀釋10倍用于預(yù)擴(kuò)增。</p>
<p style="font-weight: 400;">成分??????????????????????????????????????????體積</p>
<p style="font-weight: 400;">預(yù)擴(kuò)稀釋DNA?????????????????????? ????????????5μL</p>
<p style="font-weight: 400;">H2O??????????????????????????????????????????? 9.85μL</p>
<p style="font-weight: 400;">10×PCR Buffer???????????????????????????????? 2μL</p>
<p style="font-weight: 400;">2.5mM?dNTP???????????????????????????????????? 1.8μL</p>
<p style="font-weight: 400;">Mse I引物（50ng／μL）???????????????????????? 0.6μL</p>
<p style="font-weight: 400;">EcoR I引物（50ng／μL）?????????????????? ?????0.6μL</p>
<p style="font-weight: 400;">Taq酶（5U／μL）?????????????????????????????? 0.15μL</p>
<p style="font-weight: 400;">礦物油???????????????????????????????????????? 8μL</p>
<p style="font-weight: 400;">選擇擴(kuò)增程序：</p>
<p style="font-weight: 400;">Step1?????????????????????95℃????????????????? 2min</p>
<p style="font-weight: 400;">Step2?????????????????????95℃????????????????? 50s</p>
<p style="font-weight: 400;">Step3?????????????????????65℃??????? ??????????40s（每循環(huán)降低1℃）</p>
<p style="font-weight: 400;">Step4?????????????????????72℃????????????????? 60s</p>
<p style="font-weight: 400;">Step5????????????????? GO TO Step2????????????? 13 cycle</p>
<p style="font-weight: 400;">Step6?????????????????????95℃????????????????? 50s</p>
<p style="font-weight: 400;">Step7?????????????????????56℃????????????????? 40s</p>
<p style="font-weight: 400;">Step8????????????????? ???72℃????????????????? 60s</p>
<p style="font-weight: 400;">Step9????????????????? GO TO Step6????????????? 31 cycle</p>
<p style="font-weight: 400;">S</p>

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 <p>上一篇: <a href="http://www.ninbeiqian.cn/jiandingn-806.html" rel="prev">孔雀河清淤疏浚涉及居民種植林木 新疆臻冠達(dá)受托鑒定價(jià)值</a> </p>  
 <p>下一篇: <a href="http://www.ninbeiqian.cn/jiandingn-556.html" rel="next">蘑菇死亡數(shù)量、死亡原因及死亡蘑菇的價(jià)值進(jìn)行鑒定</a></p> 
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